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產(chǎn)品展示

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NANOLAB 3D Gel™即用型 3D細胞培養(yǎng)水凝膠

簡要描述:NANOLAB 3D Gel™即用型 3D細胞培養(yǎng)水凝膠,為無動物源性多糖水凝膠體系,模仿天然細胞外基質(ECM) 環(huán)境。水凝膠為即用型中性 pH 溶液,室溫即可穩(wěn)定保存。

  • 產(chǎn)品型號:3D Gel /3D Gel-RGD
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2019-09-10
  • 訪  問  量:2083
詳細介紹
品牌其他品牌貨號3D Gel /3D Gel-RGD
規(guī)格10ml/瓶供貨周期現(xiàn)貨
應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

NANOLAB  3D Gel™即用型 3D細胞培養(yǎng)水凝膠

產(chǎn)品介紹:

即用型 3D 細胞培養(yǎng)水凝膠

產(chǎn)品描述和規(guī)格

3D Gel™ 為無動物源性多糖水凝膠體系,模仿天然細胞外基質(ECM) 環(huán)境。水凝膠為即用型中性 pH 溶液,室溫即可穩(wěn)定保存。使用時,只需與細

胞培養(yǎng)基混合即可形成水凝膠基質。水凝膠顏色透明,具有可滲透性,相容 于多種細胞成像系統(tǒng)。培養(yǎng)在水凝膠系統(tǒng)的細胞可在試驗后輕松收獲,水凝 膠也可注射,非常適合體內研究。3D Gel 為細胞創(chuàng)造一個具功能性且優(yōu) 化的環(huán)境,讓細胞感覺在家一樣。從 2D 凝膠培養(yǎng),3D 細胞培養(yǎng)到動物注射, 3D Gel 提供一個可以同時適用于體外研究與活體實驗的共通操作平臺。 TheWell 有兩種水凝膠系統(tǒng):

3D Gel – 適用于懸浮細胞系

3D Gel-RGD(RGD 肽修飾的 3D Gel)– 適用于貼壁細胞

應用說明:

產(chǎn)品:          3D Gel (Cat#: NANO001)

                3DGel-RGD (Cat#: NANO002)

僅供科研用途,不得用于診斷過程。

3D細胞培養(yǎng)

(可注射水凝膠制備)

材料:

3D Gel,細胞培養(yǎng)基,微量移液器或注射器,細胞培養(yǎng)孔板,細胞, 37 ?C 水浴

方法:

1.     在 37?C 預熱 3D Gel 溶液和細胞培養(yǎng)基。

2. 向 4mL 3D Gel 溶液中加入 1mL 細胞懸液,使用微量移液器(或 快速渦旋振蕩)輕輕混勻,盡量不要產(chǎn)生氣泡。對于水凝膠注射:混合 物可轉移到注射器,水凝膠在穩(wěn)定 15-30 分鐘后即可用于注射。)

3.     將水凝膠混合液轉移至細胞培養(yǎng)孔板。

傾斜/旋轉培養(yǎng)板,以確保水凝膠在培養(yǎng)板上包被均勻。

不同細胞板的推薦體積如下表:

4.     等待 15 分鐘至水凝膠穩(wěn)定。

5.     小心加入細胞培養(yǎng)基以覆蓋水凝膠溶液。

6.    將細胞培養(yǎng)板加入培養(yǎng)箱,每 48 小時換液

注:

l       預熱 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。

l       終細胞濃度可根據(jù)不同細胞類型調整。我們推薦 2×105 to 1×106。

2D 凝膠培養(yǎng)                                                                                                              

材料:

3D Gel,細胞培養(yǎng)基或 PBS,微量移液器,細胞培養(yǎng)孔板,細胞,37 ?C 水浴

方法:

1.     在 37 ?C 預熱 3D Gel 溶液和細胞培養(yǎng)基。

2.     向 4mL VitroGel  3D 溶液中加入 1mL 細胞培養(yǎng)基(或 PBS),使用微量 移液器(或快速渦旋振蕩)輕輕混勻,盡量不要產(chǎn)生氣泡。

3.     將水凝膠混合液轉移至細胞培養(yǎng)孔板。

注:傾斜/旋轉培養(yǎng)板,以確保水凝膠在培養(yǎng)板上包被均勻。

4.     等待 15 分鐘至水凝膠穩(wěn)定。

5.     吸出多余液體,小心將細胞加到水凝膠頂部。

6.     將細胞培養(yǎng)板加入培養(yǎng)箱,每 48 小時換液。

注:

l       預熱 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。

l       終細胞濃度可根據(jù)不同細胞類型調整。

 

NANOLAB  3D Gel™即用型 3D細胞培養(yǎng)水凝膠

初次使用說明

(請在使用產(chǎn)品前仔細閱讀)

請根據(jù)不同的細胞系和培養(yǎng)基組分優(yōu)化 VitroGel  3D 水凝膠系統(tǒng),以得到更

的結果。初次使用用戶,強烈建議培養(yǎng)不同的細胞系時,都進行水凝膠濃 度梯度測試。

 

請參照以下步驟設置水凝膠濃度梯度:

1.     稀釋:可通過稀釋水凝膠溶液調節(jié)終水凝膠強度:直接將水凝膠溶液 與去離子水或 0.1X PBS(不含鈣或鎂離子)以 1:0-1:5(水凝膠溶液: 去離子水,v/v)室溫混合。(終膠強度 1:0 > 1:1 > 1:2 > 1:3 > 1:4 > 1:5)

2.     成膠:稀釋的水凝膠溶液和細胞培養(yǎng)基不同的混合比例會影響成膠速度 及終的膠強度。推薦的混合比例為 4:1-1:3(稀釋的水凝膠:細胞培養(yǎng) 基,  v/v)。

l       相同稀釋度的水凝膠溶液,添加越多細胞培養(yǎng)基,成膠越快。 對于稀釋度較高的水凝膠溶液(eg. 1:3, 1:4 or 1:5),請使用較多 的細胞培養(yǎng)液混合,以確保水凝膠在合理的時間內成膠。

l       不同細胞培養(yǎng)基的推薦混合比例,請參考下表。

 

活/死細胞分析                                                                                        

材料:

培養(yǎng)于 3D Gel 系統(tǒng)中的細胞,活/死細胞染色液,PBS,微量移液器, 熒光顯微鏡

方法:

1.     移去覆蓋于水凝膠之上的細胞培養(yǎng)基,并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。

2.     用 PBS 制備 5X 活/死細胞染色溶液

3.     將活/死細胞染色溶液直接加入到水凝膠中并淹沒整個凝膠。推薦體積如 下表:

4.     在黑暗中孵育 5 分鐘,在熒光顯微鏡下觀察。

注:

l    推薦使用 5X 染色液作為起始濃度。可基于不同細胞系和成像系統(tǒng)優(yōu)化 更佳濃度。

l    細胞染色后應盡快分析

 

細胞收獲

材料:

培養(yǎng)于 3D Gel 系統(tǒng)中的細胞,0.1XPBS 或去離子水,離心管,微量移

液器,37?C 水浴,漩渦震蕩儀

方法:(使用 24 孔板,250μL 膠/孔為例)

1.     在 37℃水浴預熱 0.1X PBS(或去離子水)及空的離心管。

2.     由培養(yǎng)箱取出細胞培養(yǎng)板,棄掉覆蓋于水凝膠頂部的培養(yǎng)基。

3.     每孔加入 1 mL 預熱的 0.1X PBS,并上下吹打以*混勻。

4.     將混合物加入預熱的離心管。

5.     用 1 mL 預熱的 0.1X PBS 潤洗每個孔,并加入離心管中。

6.     上下吹打,充分混勻,并加入預熱的 0.1X PBS 至 10mL。

7.     將離心管漩渦震蕩 5-10 秒,并在 37℃水浴放置 1-5 分鐘(可選)。

8.     1,000 rpm 離心 2-5 分鐘,棄上清,收集細胞沉淀。

9.     用預熱的 0.1X PBS 重懸細胞,如果需要可重復 6-8 步驟一次(可選)。

注:

l       使用預熱的 0.1X  PBS 或去離子水,不要使用冷的溶液或 1X PBS(或 高離子濃度的細胞培養(yǎng)基)。

l       根據(jù)不同細胞系優(yōu)化離心的速度和時間。

 

熒光染色:

材料:

培養(yǎng)于 3D Gel 系統(tǒng)中的細胞,PBS,微量移液器,固定液(4%甲醛 PBS 溶液),滲透液(0.1% Triton X-100 PBS 溶液),肌動蛋白抑制劑染色液,細 胞核染色液,微量移液管,熒光顯微鏡。

 

方法:

1.     移去覆蓋于水凝膠之上的細胞培養(yǎng)基,并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。

2.     將固定液加入水凝膠中,并在室溫孵育 30 分鐘。

3.     棄去固定液,并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。

4.     加入滲透液并淹沒整個凝膠,置于室溫 5 分鐘。

5.     棄去滲透液,并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。

6.     加入肌動蛋白抑制劑染色液,室溫,黑暗孵育 1 小時。

7.   棄去肌動蛋白抑制劑染色液,并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。

8.     加入細胞核染色液,室溫,黑暗孵育 5 分鐘。

9.     棄去細胞核染色液, 并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。

10.   熒光顯微鏡下觀察。

注:

l       根據(jù)產(chǎn)品使用說明配制染色液??筛鶕?jù)不同細胞系和水凝膠調節(jié)染色液 終濃度。

l       在清洗步驟中,小心添加或移除溶液,以避免損失水凝膠/細胞。

l       孵育時間可根據(jù)不同細胞系調整。

l       水凝膠加入染色液后,應避免光照。

l       確保 PBS 沖洗步驟*,同時水凝膠在整個過程中都需要溶液覆蓋。

 

組織學分析:

材料:

培養(yǎng)于 3D Gel 系統(tǒng)中的細胞,PBS,卡夾,石蠟,二甲苯,固定液(10% 福爾馬林),乙醇(50-100%)

方法:

1.     移去覆蓋于水凝膠之上的細胞培養(yǎng)基,并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次

2.     將固定液加入水凝膠中,并在室溫孵育 30 分鐘。

3.     棄去固定液,并用 PBS 沖洗水凝膠 3 次。

4.     將水凝膠放于卡夾中,用乙醇,按照以下順序脫水:

50%(10 分鐘) - 70%(10 分鐘) - 80%(10 分鐘) - 95%(10 分鐘) - 100%(10 分鐘) - 100%(10 分鐘) - 100%(10  分鐘)。

5.     將乙醇換為二甲苯,按照以下順序脫水:

65%乙醇:35%二甲苯(10-15 分鐘)-50%乙醇+50%二甲苯(10-15 分鐘)- 35%乙醇+65%二甲苯(10-15 分鐘) - 100%二甲苯(10-15 分鐘) - 100%二甲苯(10-15 分鐘) - 100%二甲苯(10 分鐘)

6.     將二甲苯換為石蠟,按照以下順序:

65%二甲苯+35%石蠟(30  分鐘)  -  50%二甲苯+50%石蠟(30 分鐘) -

35%二甲苯+65%石蠟(30 分鐘) - 100% 石蠟 (1-2 小時) - 100% 石 蠟(1-2 小時或過夜)

7.     嵌入新鮮的石蠟中后,切片,放于顯微鏡載玻片上。

8.     根據(jù)不同的應用進行染色和組裝。

 

注:

l    根據(jù)不同細胞系和水凝膠大小優(yōu)化孵育時間。確保水凝膠在整個過程中 都被溶液覆蓋。

 

 

表 B:不同細胞的推薦稀釋比例和混合比例

 


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